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酵母表達(dá)載體構(gòu)建
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責(zé)編：轉(zhuǎn)導(dǎo)生物

技術(shù)概述

酵母是單細(xì)胞低等的真核生物，具有生長快、成本低、易于遺傳操作，能對外源蛋白進(jìn)行翻譯后加工和修飾、不產(chǎn)生有毒產(chǎn)物等特點(diǎn)，認(rèn)為是外源蛋白的合適宿主[1]。酵母分為三類：第一是釀酒酵母；第二是栗酒裂殖酵母；第三是非常規(guī)酵母，主要有巴氏畢赤酵母、乳酸克魯維亞酵母等[2]。基因工程最早使用的是釀酒酵母，然后又開發(fā)了裂殖酵母（畢赤酵母）、甲醇酵母和克魯維酸酵母，目前應(yīng)用最廣泛地是釀酒酵母和畢赤酵母。

（轉(zhuǎn)導(dǎo)生物編輯，何晴晴修善）

技術(shù)詳情

載體

啟動子

報告基因/標(biāo)簽

原核抗性

篩選標(biāo)記

備注

p416 GPD

GPD

URA3

氨芐青霉素

URA3

可供構(gòu)建

pESC-ura

GAL1,GAL10

C-Myc,C-Flag

氨芐青霉素

His3,URA3

可供構(gòu)建

pESC-His

GAL1,GAL10

C-Myc,C-Flag

氨芐青霉素

His3

可供構(gòu)建

pESC-Leu

GAL1,GAL10

C-Myc,C-Flag

氨芐青霉素

Leu2

可供構(gòu)建

pYES2-CT

GAL1

C-His,C-V5

氨芐青霉素

URA3

可供構(gòu)建

pYES2

GAL1

/

氨芐青霉素

URA3

可供構(gòu)建

pYX212

TPI

C-HA

氨芐青霉素

URA3

可供構(gòu)建

pYC2-CT

GAL1

C-V5,C-6×His

氨芐青霉素

URA3

/

pRS316

T7

/

氨芐青霉素

URA3

/

pYC2-NT A

GAL1

N-6×His , N-Xpress,?C-V5 ,C-6×His

氨芐青霉素

URA3

/

pYC2-NT B

GAL1

N-6×His , N-Xpress,?C-V5 ,C-6×His

氨芐青霉素

URA3

/

pYC2-NT C

GAL1

N-6×His , N-Xpress,?C-V5 ,C-6×His

氨芐青霉素

URA3

/

pYC16

TEF1

GFP

氨芐青霉素

URA3

/

pYC25

TEF1

YFP

氨芐青霉素

URA3

/

pYC119

TEF1

C-3×FLAG

氨芐青霉素

URA3

/

YCplac22

Lac

/

氨芐青霉素

TRP1

/

YCplac33

Lac

/

氨芐青霉素

URA3

/

YCplac111

Lac

/

氨芐青霉素

LEU3

/

YEplac112

Lac

/

氨芐青霉素

TRP1

/

YIplac128

Lac

/

氨芐青霉素

LEU2

/

YEplac181

Lac

/

氨芐青霉素

LEU2

/

YEplac195

Lac

/

氨芐青霉素

URA3

/

YIplac204

Lac

/

氨芐青霉素

TRP1

/

YIplac211

Lac

/

氨芐青霉素

URA3

/

pYES-DEST52

GAL1

6xHis,?V5

氨芐青霉素

URA3

/

pRS403

T7

/

氨芐青霉素

His3

/

pRS414

T7

/

氨芐青霉素

TRP1

/

pRS415

T7

/

氨芐青霉素

LEU2

/

pRS416

T7

/

氨芐青霉素

URA3

/

pYES2-EGFP

GAL1

/

氨芐青霉素

URA3

/

pESC-TRP

GAL1,GAL10

C-Flag, C-Myc

氨芐青霉素

TRP1

/

pYES6-CT

GAL1

C-His, C-V5

氨芐青霉素

殺稻瘟菌素

/

pYES3-CT

GAL1

C-His, C-V5

氨芐青霉素

TRP1

/

pYES2-NT?A

GAL1

N-6×His, N-Xpress, C-6×His, C-V5

氨芐青霉素

URA3

/

?

?
（轉(zhuǎn)導(dǎo)生物編輯，何晴晴修善）

載體

啟動子

報告基因/標(biāo)簽

原核抗性

篩選標(biāo)記

備注

pPICZαB

AOX1

C-Myc,C-His

博來霉素

HIS4

/

pPICZB

AOX1,EM7

C-Myc,C-His

博來霉素

HIS4

/

pPIC9K

AOX1

N-alpha

氨芐青霉素/卡那霉素

HIS4

/

pPIC9

AOX1

N-alpha

氨芐青霉素/卡那霉素

HIS4

/

pPICZ?A

AOX1

C-Myc,C-6xHis

博來霉素

HIS4

/

pGAPZA

GAP

C-Myc,C-6xHis

博來霉素

HIS4/博來霉素

/

pPink-HC

AOX1

/

氨芐青霉素

ADE2

/

pPIC6αC

AOX1

C-Myc,C-6xHis

殺稻瘟菌素

殺稻瘟菌素

/

pPIC6?A

AOX1

C-Myc,C-6xHis

殺稻瘟菌素

殺稻瘟菌素

/

pPIC9k-His

AOX1

N-alpha,C-6xHis

氨芐青霉素和卡那霉素

HIS4

/

pPinkα-HC

AOX1

N-alpha

氨芐青霉素

ADE2

/

pPIC3.5K

AOX1

/

氨芐青霉素和卡那霉素

HIS4

/

pPICZC

AOX1

N-PHO1

氨芐青霉素和卡那霉素

HIS4

/

pMETαA/B/C

AUG1

C-V5， C-His，N-alpha

氨芐青霉素

ADE2

/

pMET A/B/C

AUG1

C-V5， C-His

氨芐青霉素

ADE2

/

pPink-LC

AOX1

/

氨芐青霉素

ADE2

/

pHIL-D2

AOX1

/

氨芐青霉素，卡那霉素

HIS4

/

pHIL-S1

AOX1

N-PHO1

氨芐青霉素，卡那霉素

HIS4

/

pPICZα A/B/C

AOX1

C-Myc, C-His

博來霉素

HIS4

/

pAO815

AOX1

/

氨芐青霉素

HIS4

/

pPIC3.5

AOX1

/

氨芐青霉素

HIS4

/

pPIC9

AOX1

/

氨芐青霉素

HIS4

/

pPR3-N

CYC1

N-HA

博來霉素

TRP1

/

?
?
（轉(zhuǎn)導(dǎo)生物編輯，何晴晴修善）

酵母單雜交技術(shù)是體外分析DNA與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)相互作用的方法[3]，是根據(jù)DNA結(jié)合蛋白與DNA順式作用元件結(jié)合調(diào)控報道基因表達(dá)的原理來克隆目的轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)節(jié)，在細(xì)胞內(nèi)分析鑒定轉(zhuǎn)錄因子和順式作用元件的結(jié)合。酵母單雜交應(yīng)用：鑒別DNA結(jié)合位點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)潛在的結(jié)合蛋白基因；對DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域進(jìn)行分析[4]

載體

啟動子

報告基因/標(biāo)簽

原核抗性

篩選標(biāo)記

備注

pABAi

URA3

/

氨芐青霉素

URA3

/

pGADT7-Rec

T7,ADH1

/

氨芐青霉素

LEU2

/

pHISi

minHIS3

/

氨芐青霉素

URA3

?

pHIS2

TRP1,T7,T3

/

卡那霉素

TRP1,HIS3

/

pHIS2.1

TRP1 ,T7,T3

/

卡那霉素

TRP1,HIS3

/

pLacZi

CYC1

/

氨芐青霉素

URA3

/

?
?
（轉(zhuǎn)導(dǎo)生物編輯，何晴晴修善）

酵母雙雜交是通過對報告基因的表型進(jìn)行檢測以實(shí)現(xiàn)對蛋白質(zhì)間相互作用的研究[5]。酵母基因的轉(zhuǎn)錄由轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子和啟動子共同調(diào)節(jié)，酵母轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子由DNA結(jié)構(gòu)域（BD）和轉(zhuǎn)錄激活域（AD）組成，轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子依靠BD結(jié)合基因上游的激活序列（UAS），AD激活下游基因的表達(dá)，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)X、Y分別于BD和AD形成2個融合蛋白（X-BD、Y-AD），當(dāng)X、Y相互作用時，與X、Y融合的BD，AD在空間上接近，從而恢復(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的轉(zhuǎn)錄激活作用，激活報告基因的表達(dá)[6]。酵母雙雜交的應(yīng)用：用已知功能的蛋白質(zhì)基因篩選與cDNA文庫相互作用的新蛋白質(zhì)；研究免疫應(yīng)答的遞呈效應(yīng)和發(fā)病機(jī)理；尋找具有作用的肽類藥物；建立基因組蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)。[7]

載體

啟動子

報告基因/標(biāo)簽

原核抗性

篩選標(biāo)記

備注

?

pACT2-AD

ADH1

N-HA

氨芐青霉素

LEU2

/

pAD-GAL4-2.1

ADH1

/

氨芐青霉素

LEU2

/

?

pB42AD

GAL1

N-HA

氨芐青霉素

TRP1

/

?

pBT3-C

CYC1

C-Cub，C-LexA,VP16

卡那霉素

LEU2

/

pBT3-N

CYC1

N-Cub，N-LexA,VP16

卡那霉素

LEU2

/

pBD-GAL4-Cam

ADH1

/

氯霉素

TRP1

/

?

pDEST32

ADH1

/

慶大霉素

LEU2

/

?

pGBKT7-Lam

ADH1

C-Myc

卡納霉素

TRP1

/

?

pGADT7

ADH1

N-HA

氨芐青霉素

LEU2

/

pGADT7-T

ADH1

N-HA

氨芐青霉素

LEU2

/

pGADT7-GW

ADH1

N-HA

氨芐青霉素

LEU2

/

pGBKT7

ADH1

C-Myc

卡納霉素

TRP1

/

?

pGBKT7-53

ADH1

C-Myc

卡納霉素

TRP1

/

?

pGBKT7-GW

ADH1

N-Myc

卡那霉素

TRP1

/

pMyr

GAL1

/

氯霉素

URA3

/

?

pNubG-Fe65

ADH1

/

氨芐青霉素

TRP1

/

pSos-MAFB

ADH1

/

氨芐青霉素

LEU2

/

pSos

ADH1

/

氨芐青霉素

LEU2

/

pPR3-C

ADH1

C-HA，C-NubG

氨芐青霉素

TRP1

/

pPR3-N

CYC1

N-NubG；N-HA

氨芐青霉素

TRP1

/

?
?
（轉(zhuǎn)導(dǎo)生物編輯，何晴晴修善）
?

酵母三雜交系統(tǒng)是在酵母雙雜交思想上提出的，酵母三雜交和酵母雙雜交都利用了釀酒酵母細(xì)胞GAL4調(diào)控半乳糖苷酶基因的轉(zhuǎn)錄，酵母三雜交是在酵母雙雜交的基礎(chǔ)上，研究兩個蛋白質(zhì)與第三個成分間的相互作用，第三個成分可以是蛋白質(zhì)、RNA或小分子藥物[8]。酵母三雜交的應(yīng)用：在RNA文庫中篩選與已知蛋白相結(jié)合的RNA;在蛋白質(zhì)文庫中篩選與已知RNA相互作用的蛋白質(zhì)；克隆特征未知的蛋白質(zhì)序列；研究RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合體的作用[9]。

載體

啟動子

報告基因/標(biāo)簽

原核抗性

篩選標(biāo)記

備注

pBridge

ADH1

/

氨芐青霉素

TRP1

/

?
?
（轉(zhuǎn)導(dǎo)生物編輯，何晴晴修善）

載體

啟動子

報告基因/標(biāo)簽

原核抗性

篩選標(biāo)記

備注

pML104

GAP

/

氨芐青霉素

URA3

/

pML107

GAP

/

氨芐青霉素

LEU2

/

p414-TEF1p-Cas9-CYC1t

TEF1

/

氨芐青霉素

TRP1

/

pJH001

GAP

/

氨芐青霉素

LEU2

/

?
?
（轉(zhuǎn)導(dǎo)生物編輯，何晴晴修善）

1. 宋麗雅等. 幾種主要的酵母表達(dá)系統(tǒng)研究進(jìn)展[J]. 中國輸血雜志, 2003, 16: 209-211

2. 董清華等. 酵母表達(dá)系統(tǒng)研究進(jìn)展與展望[J]. 北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報, 2008, 23; 72-75

3. Alexander MK et al. One-hybrid systems for detecing protein-DNA interactions[J]. Methods ?Mol Biol, 2001, 177: 241-259

4. 馬守東等. 酵母單雜交技術(shù)的原理及應(yīng)用[J]. 世界華人消化雜志, 2003, 11:450-451

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  • 刀鋒上的麥苗
    武漢轉(zhuǎn)導(dǎo)生物實(shí)驗(yàn)室有限公司
  • 漿糊小蝦
    某某生物公司
  • 秋荷楓葉
    某某生物公司
  • 婉然輕箋
    某某生物公司

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  1. 萌蛋萌蛋
    萌蛋萌蛋發(fā)布于： 

    蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)工程 表達(dá)載體時，對照組用什么酵母

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