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GST pulldown
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技術(shù)待認領(lǐng)

技術(shù)概述

蛋白-蛋白相互作用是蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能研究中最重要的方面之一。GST pulldown實驗是一個有效驗證酵母雙雜交系統(tǒng)的體外試驗技術(shù)。將靶蛋白與GST(谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶)融合表達,并將靶蛋白固化在谷胱甘肽(GSH)親和樹脂上,作為與目的蛋白親和的支撐物,充當“誘餌蛋白”,目的蛋白溶液過柱,可從中捕獲與之相互作用的“捕獲蛋白”(目的蛋白),洗脫結(jié)合物通過SDS-PAGE電泳分離,或聯(lián)用WB和MS檢測,可驗證蛋白間的相互作用或篩選獲取相應(yīng)的目的蛋白,從而證實兩種蛋白間的相互作用或篩選相應(yīng)的目的蛋白。

“誘餌蛋白”和”捕獲蛋白”均可通過細胞裂解物、純化的蛋白、表達系統(tǒng)以及體外轉(zhuǎn)錄翻譯系統(tǒng)等方法獲得。此方法簡單易行,操作方便。

(資料來源:金開瑞生物,聚生物整理)

技術(shù)詳情

(XXX編輯,XXX修善)

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