技術待認領
技術概述
雙分子熒光互補(bimolecular fluorescence complementation， BiFC)分析技術，是由Hu等在2002年最先報道的一種直觀、快速地判斷目標蛋白在活細胞中的定位和相互作用的新技術。
該方法利用綠色熒光蛋白(green fluorescent protein，GFP)及其突變體的特性作為報告基因，將熒光蛋白分割成兩個不具有熒光活性的分子片段，再分別與目標蛋白連接。如果兩個目標蛋白因為有相互作用而靠近，就使得熒光蛋白的兩個分子片段在空間上相互靠近，重新形成活性的熒光基團而發(fā)出熒光。在熒光顯微鏡下，就能直接觀察到兩目標蛋白是否具有相互作用，并且在最接近活細胞生理狀態(tài)的條件下觀察到其相互作用發(fā)生的時間、位置、強弱、所形成蛋白質(zhì)復合體的穩(wěn)定性，以及細胞信號分子對其相互作用的影響等。
該技術巧妙地將熒光蛋白分子的兩個互補片段分別與不同的目標蛋白融合表達，如果熒光蛋白活性恢復則表明兩目標蛋白發(fā)生了相互作用。其后發(fā)展出的多色熒光互補技術(multicolor BiFC)，不僅能同時檢測到多種蛋白質(zhì)復合體的形成，還能夠?qū)Σ煌鞍踪|(zhì)間產(chǎn)生相互作用的強弱進行比較。
目前，該技術已用于轉錄因子，G蛋白βγ亞基的二聚體形式，不同蛋白質(zhì)間產(chǎn)生相互作用強弱的比較以及蛋白質(zhì)泛素化等方面的研究工作上。
（資料來源：百度百科）
技術詳情
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